Bakteriofág Lambda
BAKTERIOFÁG λ ( LAMBDA )
Je to vírus rozmnožujúci sa v baktériách ( najmä E. coli ).
Vlastnosti:
- Klonovacia kapacita 23 kb
- Lineárna 2-vláknová molekula s dĺžkou 47 000 bp
- Cos miesta ( kohézne konce ) na 5´ konci
- Genóm:
- 40% tvoria gény pre syntézu hlavičky a bičíka
- 40% tvoria gény pre lyzogénny stav fága. Je to tzv. neesenciálna oblasť genómu
- 20% tvoria gény regulačné, zodpovedné za replikáciu a fága a lýzu bunky
Akákoľvek úprava bakteriofága spôsobuje vznik CHÁRONOV = derivátov λ fágu, keď sa donorová DNA vkladá na miesto génov lyzogénneho cyklu fágu λ:
- INZERČNÉ VEKTORY, v ktorých sa donorová DNA vkladá do 1 restrikčného miesta na DNA fága λ. Klonovacia kapacita je 13 kb.
- SUBSTIUČNÉ VEKTORY, u ktorých sa donorová DNA vkladá na miesto stredného úseku fágového vektora. Počiatočné aj konečné miesto úseku ( teda 2 miesta ) a teda aj celý úsek je pred klonovanín vyštiepený pomocou RE. Klonovacia kapacita je 9-23 kb.
Použitie bakteriofága λ ako vektora má niekoľko výhod oproti plazmidovým vektorom:
- Klonovacia kapacita je až 23 kb, teda je 2x väčšia ako u plazmidov
- Rekombinantná DNA sa do hostiteľskej bunky môže preniesť prostredníctvom fágových kapsidovv procese fágovej infekcie, ktorej efektivita je rádovo niekoľkokrát vyššia ako efektivita transformácie plazmidovou DNA
